目前，CRISPR/Cas9基因編輯技術，由于實驗設計簡單、試驗周期短、成本低及基因組上**存在的sgRNA識別目標序列等特點而占據(jù)了基因編輯的主要市場，并**應用于創(chuàng)建突變體或突變體庫、目標基因的功能驗證（互補實驗）、創(chuàng)建新的優(yōu)良等位基因、創(chuàng)建新的種質(zhì)資源、基因組定點修飾，縮短育種年限等方面。

CRISPR全稱為成簇規(guī)律間隔的短回文重復序列，Cas9蛋白是一種能降解DNA分子的核酸酶，其中含有兩個負責切割DNA雙螺旋的活性位點?；蚪MDNA在被CRISPR/Cas9復合體特異性識別后Cas9核酸內(nèi)切酶對目標基因組DNA雙鏈進行切割，造成DNA雙鏈斷裂（DSB），而細胞中的同源重組修復(HDR)機制和非同源末端連接(NHEJ)機制再對DNA雙鏈進行修復（圖1）。在修復過程中會隨機插入或刪除核苷酸（InDel），單堿基突變（SNP），從而形成移碼突變，*終造成目標基因功能的缺失，實現(xiàn)基因敲除?，F(xiàn)在檢測修飾后的DNA雙鏈的方法主要有以下集中：1.Surveyor或者T7E1核酸酶分析；2.PCR-RFLP分析；3.高分辨率熔解曲線（HRM）分析；4.單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）分析；5.熒光PCR等。以上幾種均只能檢測到DNA雙鏈是否發(fā)生突變，而要檢測編輯基因的目標DNA序列，就需要通過PCR將目的位點擴增并送Sanger測序。但常規(guī)的Sanger測序方法只能將含有目標靶點的PCR產(chǎn)物克隆到質(zhì)粒載體，每個樣品取多個單克?。?-6個）測序，傳統(tǒng)測序費時費力費用又高。

針對上述作物多拷貝基因及多倍體作物基因編輯后代篩選的難題，翼和生物利用多重PCR技術（**號CN201610736856.4、CN201510761091.5），結(jié)合高通量測序技術，可同時對大量樣本多目標區(qū)域進行靶向序列分析，*后獲得客戶所需要的突變位點。翼和開發(fā)的多重PCR的技術通過基因組特異性引物（覆蓋多個靶點及側(cè)翼序列）同時對基因編輯后代個體基因組的多個目標區(qū)域（多拷貝基因或者多基因，可達數(shù)十個區(qū)域）進行PCR捕獲，PCR建庫后再進行高通量測序，平均測序深度1000x，生信分析后獲得目標編輯位點序列信息及比例。相比于基因編輯的其他檢測方式，本方案既能準確的獲知編輯后代的基因型，又能同時對基因編輯后代群體進行多拷貝，多基因目標靶點分析及子代基因型**，**減輕了科研人員的科研負擔，快速準確地完成對目標基因型的篩選。