【產(chǎn)品規(guī)格】
TL50-P 50 Reactions
該產(chǎn)品用于基因組DNA的純化,純化后的DNA可用于qPCR反應(yīng)。
自備儀器:移液器、渦旋振蕩器、磁力架、心管、金屬浴。
自備試劑:80%乙醇、TE洗脫液、RNase Free Water。
低溫冷凍運(yùn)輸,4℃保存,有效期6個(gè)月。
注:本試劑盒提供試劑,使用前先低速離心后小心開啟。使用時(shí)請上下輕柔顛倒十次混勻,避免起泡,并低速短暫離心后使用。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1、DNA前處理
1 μg DNA樣本或20 μL標(biāo)準(zhǔn)品/20 μL校正品中加入10 μL DNA純化液并混勻,37 ℃ 金屬浴30 min,90 ℃ 金屬浴
2 min。
2、DNA磁珠分選
DNA磁珠分選操作步驟準(zhǔn)備工作:將磁珠由 2-8 ℃中取出,室溫平衡至少30 min,配制80%乙醇。
Step1 渦旋震蕩或充分顛倒磁珠以保證混勻。
Step2 結(jié)合(吸附目的片段)
1. 根據(jù)要求向含有樣本的離心管內(nèi)加入30 μL磁珠懸液,渦旋混勻(或使用移液器小心吹打10次);
2. 室溫靜置 5 min;
3. 室溫12000 rpm 離心30 s(該步驟可以加速聚集磁珠,可選);
4. 將離心管置于磁力架上至溶液完全澄清(約1 min),棄去上清。
Step3 清洗
保持離心管固定于磁力架上,加入200 μL 80%乙醇,靜置1 min,無需重懸磁珠,棄去上清(保持離心管固定于磁力架上);重復(fù)該操作一次。
Step4 除醇
保持離心管置于磁力架上,靜置通風(fēng)2-5 min除醇。
注:除醇過程中請勿過分干燥磁珠,否則會(huì)降低純化效率。
Step5 洗脫
1. 將離心管從磁力架上取下,加入30μL TE洗脫液洗脫,渦旋混勻(或使用移液器小心吹打10次);
2. 室溫靜置 5 min;
3. 室溫 12000 rpm 離心30 s(該步驟可以加速聚集磁珠,可選);
4. 將離心管置于磁力架上至溶液完全澄清(約1 min),待磁珠完全吸附后將上清轉(zhuǎn)移至新樣品管中備用。
【特別注意事項(xiàng)】
1. 為了您的安全和健康,請穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩,并戴手套 操作;
2. 本試劑為磁珠懸液,嚴(yán)禁冷凍、離心,第一次使用前需 充分渦旋混勻;
3. 進(jìn)行 DNA 片段分選時(shí),建議樣本體積≥50 μL,若樣本體積不足50 μL請用RNase Free Water補(bǔ)足;
4. 磁珠使用前須提前半小時(shí)取出,平衡至室溫;
5. 任何過程中嚴(yán)禁磁珠過分干燥,否則會(huì)降低洗脫效率;
6. 80%乙醇需現(xiàn)用現(xiàn)配,否則將影響回收效率。
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